TwistDx公司RPA技術試劑盒介紹

近期，TwistDx推出了一系(xi)列全新的液態(tai)重組酶(mei)聚合酶(mei)擴增 (RPA)試(shi)劑盒，這些試(shi)劑盒非常(chang)適(shi)合需要不使用熱(re)循環儀(yi)就能(neng)在15分(fen)鐘內完(wan)成 DNA/RNA 擴增的實驗室以及想要靈活構建試(shi)驗體系(xi)的研究人(ren)員使用。

TwistAmp®?Liquid試(shi)(shi)劑(ji)盒提(ti)供(gong)經甘(gan)油穩定化處理的(de)(de)液態(tai)RPA試(shi)(shi)劑(ji)，該形態(tai)對于(yu)在實驗(yan)室執行 PCR 和其他(ta)基于(yu)酶(mei)的(de)(de)反應(ying)的(de)(de)任何人(ren)來說都(dou)非常熟(shu)悉。這些試(shi)(shi)劑(ji)各自裝于(yu)單獨的(de)(de)試(shi)(shi)管中(zhong)，用戶可隨意從中(zhong)移取任何量的(de)(de)酶(mei)混合液來構建(jian)自己所(suo)選的(de)(de)RPA反應(ying)體積(ji)，配制用于(yu)多次(ci)反應(ying)的(de)(de)預混液，或者以各種 RPA 組分比(bi)例(li)進行實驗(yan)以優化試(shi)(shi)驗(yan)。

除了具有(you)室溫穩定性的(de)(de)(de)凍干態TwistAmp® RPA試劑盒這(zhe)一旗艦產品，本次新推出(chu)的(de)(de)(de)?TwistAmp® Liquid試劑盒是現場或定點試驗(yan)(yan)開發(fa)(fa)的(de)(de)(de)理想(xiang)之選。液體形態讓(rang)實驗(yan)(yan)室更(geng)容(rong)易地在日常工作中使用快速簡單(dan)的(de)(de)(de)RPA法（該方法有(you)時(shi)甚至采用與PCR相(xiang)同(tong)的(de)(de)(de)引(yin)物）取(qu)代 PCR法，以(yi)及更(geng)容(rong)易地開發(fa)(fa)出(chu)定制的(de)(de)(de)試驗(yan)(yan)。

TwistDx公司RPA技術試劑盒介紹

產品組成:

相關擴(kuo)展試劑盒額外提(ti)供試劑:

◆ 100 µl 50x 外切(qie)酶 III (TwistAmp®; Liquid exo/exo RT kits);

◆ 100 µl 50x 逆轉錄酶 (RT) (TwistAmp® Liquid Basic RT/exo RT kits);

◆ 100 µl of 陽性對照模板(ban) (DNA with TwistAmp® Liquid exo/Basic kits, RNA with TwistAmp® Liquid Basic RT/exo RT kits);

◆ 45 µl of 陽性oligo mix (oligo mix consists of primers for Basic/Basic RT kits, primers plus a ?uorescently labelled exo probe in the exo/exo RT kits)

其他必需試(shi)劑(非試(shi)劑盒提供):

◆ ddH2O; dNTPs; 寡聚(ju)核苷酸; RNase抑制(zhi)劑(ji)(僅(jin)用于RT試劑(ji)盒)

產品信息:

附(fu): TwistAmp liquid試(shi)劑盒(he)Q&A

Q 20x核心反應(ying)mix有沉淀,是(shi)否影響其功能?

A在(zai)(zai)低溫保存時(shi), 重(zhong)組酶和輔助蛋白在(zai)(zai)50%甘油中20x核心(xin)(xin)反(fan)應mix中有時(shi)會發(fa)生可逆的共沉淀(dian)反(fan)應.所以在(zai)(zai)室溫融化混勻后(hou)離心(xin)(xin)使其返回(hui)溶液形(xing)式(shi)并不影響其功能(neng)。

Q 使用(yong)Liquid試劑盒做多重實驗，能否制備master mix?

A 可(ke)(ke)以(yi)。Oligos, 2x Reaction Buffer, water, dNTPs and 10x E-mix可(ke)(ke)以(yi)預先混合，置于冰(bing)上幾(ji)個小時，在很多(duo)實例中可(ke)(ke)以(yi)過(guo)夜保存(cun)（性能上有任何改變都需要客戶自行(xing)實驗和評價）。一旦(dan)加入20x核心酶(mei)，短期保存(cun)在冰(bing)上也是可(ke)(ke)以(yi)的。

Q 使用Liquid試(shi)劑盒如何提(ti)高(gao)重復率(lv)和RNA模板的(de)擴增率(lv)?

A 先將(jiang)RNA模板(ban)和(he)醋酸鎂混合后加(jia)入(ru)反應體(ti)系中(zhong)，RNA的(de)三級結構(gou)會抑制逆(ni)轉(zhuan)錄酶的(de)活性，所(suo)以加(jia)入(ru)RNA和(he)醋酸鎂時(shi)，將(jiang)兩(liang)者(zhe)分別加(jia)到在管內壁兩(liang)側或者(zhe)將(jiang)醋酸酶加(jia)在管內蓋中(zhong)，同時(shi)離心混入(ru)體(ti)系，這(zhe)種操作會提高反應性能。

Q 在TwistAmp Liquid E-mix中有沉淀，還能使用(yong)嗎?

A 可以。少量磷酸肌酸會發(fa)生沉淀不會影響RPA反應(ying)，只需在實驗前通(tong)過渦(wo)旋將沉淀重懸離心即可。

Q 小的RPA液體(ti)反應體(ti)系是多(duo)少?

A 小低(di)至PL級，請參考(kao)

htt p://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0153359

Q 液體(ti)(ti)反應體(ti)(ti)系中需要加(jia)入(ru)多少dNTPs?

A 1.8mM(總)dNTPs 作為起始量即可。用戶(hu)也可以(yi)根據自(zi)身實驗(yan)優化濃度,有時1-12mM均適(shi)用。

Q 如何提高擴(kuo)增曲線的可重(zhong)復性?

A 優化(hua)擴(kuo)增(zeng)(zeng)曲線考慮以(yi)下(xia)因(yin)(yin)素: 對(dui)于低拷(kao)貝數模板，不(bu)穩定擴(kuo)增(zeng)(zeng)可能(neng)是(shi)(shi)因(yin)(yin)為(wei)達到檢測限或者(zhe)是(shi)(shi)反(fan)應(ying)(ying)混勻程度不(bu)同（未混勻的(de)反(fan)應(ying)(ying)擴(kuo)增(zeng)(zeng)效(xiao)(xiao)率不(bu)佳）。另(ling)外，在(zai)(zai)低溫情況下(xia)存(cun)貯，重組(zu)酶和輔助(zhu)蛋(dan)白在(zai)(zai)50%甘油(you)情況下(xia)形成沉淀,也是(shi)(shi)可能(neng)導致不(bu)穩定擴(kuo)增(zeng)(zeng)的(de)原因(yin)(yin)。所以(yi)，20x核心反(fan)應(ying)(ying)mix在(zai)(zai)室(shi)溫下(xia)解凍(dong)并震蕩(dang)渦(wo)旋將使其成為(wei)液體，不(bu)影響其功能(neng),并且有(you)效(xiao)(xiao)提高(gao)擴(kuo)增(zeng)(zeng)效(xiao)(xiao)率。不(bu)穩定擴(kuo)增(zeng)(zeng)也可能(neng)是(shi)(shi)因(yin)(yin)為(wei)master mix量不(bu)足，在(zai)(zai)加入體系前，用戶必(bi)須保證震蕩(dang)后20x核心反(fan)應(ying)(ying)組(zu)分(fen)均一。