Lumafluor公司Red Retrobeads™ 代購現(xian)貨

Lumafluor公司Red Retrobeads™ 代購現貨(huo)

螞(ma)蟻淘(tao)：4000-520-616

RetroBeads™逆向(xiang)示蹤(zong)熒(ying)光微粒是(shi)Lumafluor 公(gong)司*的逆向(xiang)示蹤(zong)產(chan)(chan)品，且(qie)是(shi)目前(qian)*證實(shi)有效的示蹤(zong)微粒（該產(chan)(chan)品的有效性經數百篇從(cong)無脊椎(zhui)動(dong)物(wu)到(dao)哺乳(ru)動(dong)物(wu)實(shi)驗的研究(jiu)論文(wen)證實(shi)），目前(qian)Lumafluor 公(gong)司的綠色(se)和紅色(se)熒(ying)光示蹤(zong)微粒產(chan)(chan)品只能從(cong)本公(gong)司采購。
  該示(shi)蹤產品體內注射高度集中(zhong)不易擴(kuo)散，信號強，對活細(xi)胞(bao)或活體無毒，且存留時(shi)間(jian)大于一年(nian)，與大多順向示蹤劑、原位(wei)雜交(jiao)檢測技(ji)術、免疫(yi)組化技(ji)術兼容。

Lumafluor公司Red Retrobeads™ 代購現貨

Lumafluor高效(xiao)RetroBeads操作說(shuo)明

一(yi)、包裝與稀釋：

Lumafluor 的beads包裝于一支密封(feng)的小瓶內，內含的濃縮beads懸(xuan)浮于(yu)蒸餾水中。如使用紅色Beads作為神經通路的(de)逆向示蹤，其稀釋方(fang)法(fa)推薦采(cai)用：大鼠視皮層(ceng)內可(ke)采(cai)用1：4比例進行稀釋而(er)不減少Beads的(de)熒(ying)光標記強度和質量。然(ran)而(er)對于(yu)*實驗(yan)我們不(bu)推(tui)薦使(shi)用稀(xi)釋的(de)Beads而(er)使用原液(ye)進行注射示蹤(zong)。除蒸餾水外(wai)，常(chang)規(gui)的鹽(yan)溶液(ye)如NaCl、KCl溶(rong)液也可作(zuo)為(wei)稀釋液。如使用綠(lv)色(se)Beads，則強烈建議使用原液，無需稀釋。

二(er)、儲存: 

    為避免蒸(zheng)發，Bead溶液(ye)應存放于冰(bing)箱內4度冷藏，切忌勿(wu)冷凍！ 冷凍的Beads將失去效用，無法使用。而(er)變干(gan)的(de)beads同樣也(ye)無法使(shi)用(yong)（無法重懸），該產品并無明顯的(de)使(shi)用(yong)期限(xian)，如(ru)按要求存放可保存數年。

三、注射：

    Beads使用壓力注射，如1 mlHamilton微量注(zhu)射器或氣壓注(zhu)射系(xi)統，如需小區域微量注(zhu)射(30-50 nl)，可采用末(mo)端30-50 um直徑的(de)(de)玻璃電(dian)極(ji)注(zhu)射(she)，而常規的(de)(de)逆向示(shi)蹤（注(zhu)射(she)量0.1-0.3 ul）可使用更大直徑的玻(bo)璃電極。盡管如此，即使注入(ru)更大的劑量(liang)，Beads，也不會(hui)明(ming)顯從(cong)注射位點擴散(san)（通常擴散(san)距離少(shao)于1mm），因此，為(wei)盡(jin)量*標記投(tou)射到(dao)一(yi)個(ge)較大神經核(he)團的神經元，需使用(yong)多點注(zhu)射。盡(jin)管Beads帶有(you)負(fu)電(dian)荷(he)，但是不(bu)建議采用離子(zi)滲透(tou)法(fa)注入(ru)示蹤(zong)Beads。

四、存活時間(jian)：

    在大多(duo)數恒溫脊椎動(dong)物系統中，檢測Beads的zui短有效時間是24小時，在48小時內標記強(qiang)度隨著體內注射時間而延長(chang)，48小(xiao)時以后(hou)熒光強(qiang)度基本(ben)保持恒定(ding)。而在冷血動物(wu)中，檢測(ce)Beads的時間推薦為1周。目前并(bing)未檢測Beads的zui長可檢測(ce)期，然而(er)在Beads的熒(ying)光強度和質量(liang)至(zhi)少可(ke)保持在體(ti)(ti)內14個月以上不變，而(er)細胞可能會(hui)被(bei)*標記。目前并未(wei)發現Beads在動(dong)物或神經元中表現出毒性作用的報道。

五、固定(ding)和處理：

    標準的固定方法是：0.1 M PBS沖洗或灌注(zhu)后(hou)在(zai)4%的多(duo)聚甲醛(quan)（0.1 M PBS配制，pH 7.4）中(zhong)固定(ding)，用戊二醛(quan)固定(ding)會產生大量(liang)的(de)組織(zhi)自發熒光(guang)，妨(fang)礙Beads標記的神經(jing)元，并且綠色Beads在戊二(er)醛固定(ding)的組織中將(jiang)*觀察不到，因此應盡量避(bi)免(mian)采用。如采用冰凍(dong)切(qie)片，切(qie)片應用PBS漂洗后用明(ming)膠包被的(de)載玻片貼片晾干(gan)，在*風干(gan)后，再(zai)用二甲苯透明(ming)1分鐘，然后用(yong)熒光封(feng)片劑（Fluoromount或Krystalon）封片。Fluoromount可從Atomergic Chemetals Corp., （Farmingdale, NY）公(gong)司購(gou)買; Krystalon可從(cong)

Harleco (EM Industries，Gibbstown, NJ）購(gou)買。切(qie)片只可短期(qi)暴露(lu)在乙醇或二甲苯中，但是長時間暴露(lu)（大于5分鐘）會損壞Beads。Beads 對甘油(you)非(fei)常敏感，在甘油(you)環(huan)境中熒(ying)光會迅速萃滅，因(yin)此切(qie)忌使(shi)用甘油(you)類(lei)封片劑，如無法避免，還(huan)可(ke)采用水楊(yang)酸甲(jia)酯代替甘油(you)作(zuo)為封片劑。封片后的(de)切(qie)片如存放于黑暗環(huan)境中，熒(ying)光Beads標(biao)記的細胞(bao)可保持一(yi)年不萃滅（但是切(qie)片的自身熒光背景會增(zeng)加）。迄(qi)今為止，還沒(mei)有成(cheng)功采用塑膠材(cai)料包被Beads標記的組織的記錄。

• 觀察(cha):

    紅色Beads中(zhong)的染料為羅(luo)丹明(ming)，因此(ci)所有與羅(luo)丹明(ming)匹配的熒(ying)光(guang)濾(lv)(lv)鏡均可使用(yong)，部(bu)分老的尼康公司(si)的羅(luo)丹明(ming)濾(lv)(lv)鏡因背景較(jiao)高(gao)，可能(neng)導致無法觀察到熒(ying)光(guang)Beads，通常Zeiss 和Leitz的標準羅丹明濾(lv)(lv)鏡可獲得較好(hao)(hao)的觀(guan)察(cha)效(xiao)果(guo)。而大(da)多綠(lv)色熒光(guang)濾(lv)(lv)鏡均可較好(hao)(hao)地觀(guan)察(cha)綠(lv)色Beads的(de)(de)(de)(de)熒(ying)(ying)(ying)光結(jie)果，設置為熒(ying)(ying)(ying)光黃(huang)的(de)(de)(de)(de)濾(lv)鏡(jing)可(ke)獲得(de)較強的(de)(de)(de)(de)明亮熒(ying)(ying)(ying)光，但是同(tong)時(shi)也帶來較高的(de)(de)(de)(de)背景干擾。較寬波(bo)段的(de)(de)(de)(de)熒(ying)(ying)(ying)光濾(lv)鏡(jing)比(bi)窄波(bo)段的(de)(de)(de)(de)熒(ying)(ying)(ying)光濾(lv)鏡(jing)可(ke)以獲得(de)更強的(de)(de)(de)(de)熒(ying)(ying)(ying)光信號。在長時(shi)間(jian)的(de)(de)(de)(de)觀察和(he)拍(pai)照(zhao)下Beads的熒(ying)光也不會(hui)淬滅。

  在低倍(bei)數(shu)或低數(shu)值孔徑物鏡下(如 X4, X10)通(tong)常難以觀察到Bads的熒光(guang)信號，只有(you)細胞被(bei)顯著(zhu)標(biao)記，X10的(de)油鏡（數(shu)值孔徑大(da)于(yu)0.4）或者更大倍數的物鏡才可觀察到。通常情況下，X 25的油鏡(jing)可以清晰地觀(guan)察到(dao)低倍(bei)鏡(jing)下無法觀(guan)察到(dao)的標記細胞。物鏡(jing)的選用對綠(lv)色(se)熒光Beads尤(you)其重(zhong)要。在(zai)做出(chu)實(shi)驗失(shi)敗的(de)決(jue)定前(qian)（在(zai)目標區(qu)域無法觀察(cha)到(dao)標記(ji)細(xi)胞(bao)），可先(xian)用油(you)鏡仔(zi)細(xi)觀察(cha)注射位(wei)點附(fu)近的(de)細(xi)胞(bao)是否被(bei)標記(ji)，此處應該(gai)觀察(cha)到(dao)大量的(de)標記(ji)細(xi)胞(bao)。

對(dui)使用綠色熒光Beads標記的額(e)外提(ti)醒：目(mu)前已(yi)發(fa)現(xian)綠色熒光Beads在(zai)年青動物(wu)比年老動物(wu)中標記更為理(li)想(xiang)的(de)情況，此外，年青動物(wu)的(de)組(zu)織自發熒光（背景）也(ye)更低，因此，假如可以的(de)話，在(zai)使用綠色熒光Beads做逆向標記實(shi)驗(yan)時請盡(jin)量使用年輕動物。

因(yin)為(wei)綠(lv)色熒光Beads的(de)激(ji)發(fa)光段比紅色熒光Beads短，因(yin)此(ci)組織自發熒(ying)光(guang)是個(ge)麻煩，因(yin)此(ci)，應采用(yong)減少自發熒(ying)光(guang)的(de)步驟以獲(huo)得更理想的(de)實(shi)驗結果，這些方法有：（1）使(shi)用更薄的切片，如(ru)30微米比40或50微米理想；（2）使用(yong)年青的動(dong)物；（3）封片后立即觀察拍照（隨著時間增加背景也會增加）。

    對使用(yong)色(se)熒光(guang)Beads標記的額外提醒：目(mu)前已發現(xian)綠(lv)色熒光Beads在(zai)年(nian)青(qing)動物(wu)比(bi)年(nian)老(lao)動物(wu)中標(biao)記更為理想(xiang)的情(qing)況，此外，年(nian)青(qing)動物(wu)的組織自發熒光（背(bei)景）也更低，因(yin)此，假如(ru)可以的話，在(zai)使用綠色熒光Beads做(zuo)逆向標(biao)記實驗時請盡量使用年輕(qing)動(dong)物。

    因為綠色熒光(guang)Beads的激發光段比紅色熒光Beads短，因此組織自(zi)發(fa)熒光是個(ge)麻煩，因此，應采(cai)用減少自(zi)發(fa)熒光的步(bu)驟以獲得更理想的實驗結果，這(zhe)些方(fang)法有(you)：（1）使用更薄(bo)的(de)切片，如30微米比40或(huo)50微米理想(xiang)；（2）使用年青的動物；（3）封片后立即觀察拍照（隨著(zhu)時間增(zeng)加背景也會增(zeng)加）。